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單人單面超凈工作臺在細(xì)胞培養(yǎng)中的無菌操作實(shí)踐

更新時間:2025-06-13      點(diǎn)擊次數(shù):290
  單人單面超凈工作臺在細(xì)胞培養(yǎng)中的無菌操作實(shí)踐是確保細(xì)胞培養(yǎng)成功和避免污染的關(guān)鍵步驟。以下是一個詳細(xì)的無菌操作實(shí)踐指南:
  一、準(zhǔn)備工作
  1.清潔與消毒:
  使用前,確保超凈工作臺內(nèi)部及周圍環(huán)境已清潔,無塵埃和雜物。
  使用75%酒精擦拭超凈工作臺臺面及臺面上所有物品,包括移液槍等。
  提前30分鐘打開超凈工作臺的紫外燈,進(jìn)行工作區(qū)表面積累的微生物的滅菌處理。滅菌完成后應(yīng)關(guān)閉紫外燈30分鐘,讓臭氧轉(zhuǎn)化為氧氣,避免對操作人員身體的刺激。
  2.預(yù)熱設(shè)備:
  將水浴鍋預(yù)熱至37攝氏度,用于后續(xù)的培養(yǎng)基預(yù)熱和細(xì)胞解凍。
  確保超凈工作臺的風(fēng)機(jī)正常運(yùn)轉(zhuǎn),提供無菌而均勻的空氣環(huán)境。
  3.穿戴防護(hù)裝備:
  實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿戴一次性口罩、帽子和醫(yī)用乳膠手套,以防止污染。
  注意手及指甲的清潔,避免戳破手套。
  二、無菌操作過程
  1.配置培養(yǎng)基:
  在超凈工作臺內(nèi),按照實(shí)驗(yàn)要求配置培養(yǎng)基,注意無菌操作。
  培養(yǎng)基應(yīng)預(yù)熱至37攝氏度,以減少對細(xì)胞的冷沖擊。
  2.細(xì)胞解凍與培養(yǎng):
  將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出,迅速放入37攝氏度的水浴鍋中不斷晃動至融化。
  將解凍后的細(xì)胞懸液放入離心機(jī)中離心,去除上清液,加入新鮮的培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液。
  將細(xì)胞懸液加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,放入37攝氏度、5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
  3.細(xì)胞傳代:
  從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,噴灑酒精并擦拭后放入超凈工作臺。
  倒出或吸出上一次的培養(yǎng)基,使用PBS清洗細(xì)胞表面分泌物。
  加入適量的胰酶進(jìn)行消化,直至大部分細(xì)胞呈圓形。
  加入培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
  將細(xì)胞懸液按一定比例分裝入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,繼續(xù)培養(yǎng)。
 

 

  三、注意事項(xiàng)
  1.無菌操作原則:
  在整個實(shí)驗(yàn)過程中,應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,防止污染。
  使用酒精燈灼燒試劑瓶口和鑷子等工具,確保無菌。
  2.超凈工作臺的使用與維護(hù):
  使用超凈工作臺時,應(yīng)適當(dāng)打開移門,保持操作區(qū)域的無菌環(huán)境。
  工作完畢后,用75%的酒精擦拭凈化工作臺面,關(guān)閉送風(fēng)機(jī),再次打開紫外燈進(jìn)行滅菌處理。
  定期更換高效過濾器,并清洗初效過濾器,以保持超凈工作臺的工作效能。
  3.實(shí)驗(yàn)人員的防護(hù):
  實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)定期進(jìn)行健康檢查,確保無傳染病等疾病。
  在實(shí)驗(yàn)過程中,應(yīng)隨時注意個人防護(hù),避免污染和交叉感染。
  單人單面超凈工作臺在細(xì)胞培養(yǎng)中的無菌操作實(shí)踐需要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,注意超凈工作臺的使用與維護(hù),以及實(shí)驗(yàn)人員的個人防護(hù)。這些措施有助于確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功和避免污染的發(fā)生。
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